小鼠生殖细胞特异基因oct4启动子片段克隆及报告载体构建

？为了实时跟踪小鼠生殖细胞的发生起源，研究其生物学特性和分化过程，本试验将oct4启动子的cr4区和cr1区插入到带有增强型绿色荧光蛋白(egfp)基因的真核报告载体中，构建了oct4启动子片段携带绿色荧光蛋白的小鼠生殖细胞特异性报告载体cr1,4-pegfp-1。用该载体转染多种细胞，在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(gfp)在细胞中的表达情况，同时以rt-pcr半定量技术检测转染细胞中oct4及其他生殖细胞特异性基因的转录情况。结果显示，gfp在小鼠胚胎干细胞、小鼠胚胎成纤维细胞（mef）和c2c12细胞中均不表达，而在p19细胞和睾丸细胞中表达。rt-pcr结果显示，oct4在p19、睾丸细胞和生殖干细胞中特异性转录。实验结果表明所构建的绿色荧光蛋白报告载体只在生殖细胞和多能生殖干细胞中内表达，该质粒可作为示踪生殖细胞的工具，同时也可以作为生殖干细胞多能性状态的一个监测标记。