羟基萘酚蓝在伪狂犬病病毒环介导等温扩增检测方法中的应用

？伪狂犬病毒(pseudorabiesvirus,prv)传统诊断方法具有程序繁琐、周期长、成本高、特异性差等缺点，本实验建立了敏感、特异的prv的环介导等温扩增(loop-mediatedisothermalamplification,lamp)检测方法，并在此基础上应用金属离子指示剂羟基萘酚蓝(hydroxynaphtholblue,hnb)进行反应结果判定。实验选取保守性较高的gb基因(glycoproteinb,糖蛋白gb)筛选引物，确定反应体系后，可在45min内完成检测。lamp方法特异性与pcr方法一致，敏感性是pcr方法的100倍，最低能够检测10个拷贝的目的基因。在hnb的应用试验中，发现lamp反应体系中，hnb浓度为150μmol/l时，阴阳性的颜色对比明显且反应的敏感性最高，可用于lamp扩增产物的判断。临床样本的检测结果表明，pcr方法和lamp方法的检出率一致。因此，本研究中所建立的lamp方法是一种高度特异敏感的，可替代pcr方法的检测技术。