菌寄生真菌黄蓝状菌(talaromycesflavus)几丁质酶基因的克隆与生物信息学分析

？菌寄生真菌的几丁质酶有很强的降解几丁质能力，在控制植物病害方面起着重要的作用。为克隆和研究菌寄生真菌黄蓝状菌(talaromycesflavus)几丁质酶基因(tfchi1)，本研究根据真菌几丁质酶基因的保守序列设计扩增基因中间片段的简并引物，采用rt-pcr、3'-race及5'-tail的方法获得了该基因的dna和mrna序列(genbank:gu361769,gu361770)。tfchi1长为2561bp，具有6个内含子，长度分别为129、78、68、65、53和59bp，包含1194bp的orf，编码一个由397个氨基酸组成的蛋白。推导的tfchi1氨基酸序列以及蛋白质结构生物信息学分析表明，该蛋白具有典型的几丁质酶催化区保守序列sxggw和dgxdxdwe，属于糖苷水解酶18家族几丁质酶，与柄篮状菌(talaromycesstipitatusatcc10500)几丁质酶(xp_002480365)氨基酸序列同源性为96%，分子量为43.47kd，等电点为4.97。该蛋白无信号肽序列，有15个潜在的n-糖基化位点，tfchi1的二级结构以无规卷曲和α-螺旋为蛋白的主要结构元件，三级结构中有(α/β)8的圆桶形结构。tfchi1转化毕赤酵母(pichiapastoris)gs115，酵母工程菌可分泌具几丁质酶活性的表达产物，重组蛋白的分子量与理论值相符。结果说明，本研究已从t.flavus中正确克隆了1个糖苷水解酶18家族几丁质酶基因。