overlappcr克隆黄牛脂肪特异性磷脂酶a2基因(adpla)及其原核表达

？脂肪特异性磷脂酶a2基因(adipose-specificphospholipasea2,adpla)在脂肪组织甘油三酯水解过程中发挥着重要的调节作用，为了构建黄牛adpla基因原核表达系统，本研究通过overlappcr方法从黄牛(bostaurus)基因组dna中得到了adpla基因编码区全长，将其克隆到pgm-t载体上，阳性克隆经测序表明，与ncbi公布的序列(genbankno.nm_001075280)完全一致。阳性质粒经bamhⅰ和hindⅲ双酶切后，将其定向重组到pet28a(+)原核表达载体上，转化感受态大肠杆菌(escherichiacoli)bl21(de3)中，用iptg诱导融合蛋白表达。sds-page电泳表明，融合蛋白his-adpla在大肠杆菌中表达，证明成功构建了adpla基因原核表达系统，为进一步研究黄牛adpla基因的功能和adpla蛋白产品开发提供了依据。