干扰水稻齿叶矮缩病毒(rrsv)非结构蛋白pns6的表达阻碍病毒在褐飞虱体内的增殖

？水稻齿叶矮缩病毒(riceraggedstuntvirus,rrsv)由介体褐飞虱(nilaparvatalugens)以持久增殖型方式传播。rrsv编码的非结构蛋白6(nonstructuralprotein6,pns6)是病毒原质的组分，但其在介体昆虫传毒中的功能未知。本研究利用dsrna诱导的rna干扰(rnainterference,rnai)技术研究pns6蛋白在病毒侵染介体昆虫中的功能。通过膜饲喂法将源于pns6基因的dsrna(dspns6)以及源于绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,gfp)基因的dsrna(dsgfp)分别导入2龄褐飞虱体内，并以饲喂10%蔗糖的处理为对照，之后于病株上获毒2d。应用免疫荧光标记技术检测发现，昆虫获毒9d后，dsgfp和10%蔗糖处理组褐飞虱的带毒率分别为27%和30%，而dspns6处理组褐飞虱的带毒率仅为10%；同时qrt-pcr检测发现，pns6蛋白的表达量受到抑制后，病毒编码的结构蛋白p8和p9的表达量也显著下降(p＜0.05)。此外，dsgfp和10%蔗糖处理组褐飞虱的传毒率分别为20%和22%，干扰pns6蛋白的表达后褐飞虱的传毒率仅为6%。研究结果表明，pns6是rrsv在褐飞虱体内增殖的重要蛋白，抑制pns6的表达显著降低褐飞虱的带毒率并抑制病毒的增殖，同时削弱褐飞虱的传毒能力，明确了pns6可作为理想的靶标用于阻断rrsv在褐飞虱体内的增殖。