苏云金芽胞杆菌fh21生物学特性及其cry1类基因的鉴定

？本研究基于一株对小菜蛾(plutellaxylostella)幼虫具有高毒力的苏云金芽胞杆菌(bacillusthuringiensis)菌株fh21，利用改进的限制性片段长度多态性聚合酶链反应(polymerasechainreaction-restrictionfragmentlengthpolymorphism,pcr-rflp)，从fh21中成功克隆出杀虫晶体蛋白(insecticidalcrystalproteins)基因cry1bb3、cry1da4、cry1ja3和cry1id3，genbank登录号分别为kj619659、kj619660、jq228425和kj619661。将上述4个基因插入表达载体peb，转化大肠杆菌(escherichiacoli)菌株rosetta(de3)，在低温条件下经异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(isopropylβ-d-1-thiogalactopyranoside,iptg)诱导表达。fh21总蛋白与4种蛋白的表达产物采用饲喂法分别对小菜蛾、棉铃虫(helicoverpaarmigera)和亚洲玉米螟(ostriniafurnacalis)进行杀虫活性测定。结果表明，fh21总蛋白对3种昆虫均有较好的杀虫活性，致死中浓度(lethalconcentration50,lc50)分别为0.801、0.502和2.858mg/l。cry1bb3、cry1ja3和cry1id3蛋白对小菜蛾和亚洲玉米螟有较好的杀虫活性，lc50分别为1.860、1.697、1.538、1.800、2.270和0.840mg/l。本研究表明，btfh21菌株对多种农业害虫具有很高的杀虫活性，同时对其进行杀虫基因测定并对杀虫基因进行了杀虫活性测定，几种cry1类基因的发现为重要农业害虫的防治提供了更多的选择。