苏云金芽胞杆菌nbic-380菌株营养期杀虫蛋白3aa基因(vip3aa)在大肠杆菌及芽胞杆菌中的表达

？营养期杀虫蛋白3a(vegetativeinsecticidalprotein3a,vip3a)对鳞翅目(lepidoptera)害虫具有广谱杀虫活性，具有重要研究意义。本研究以对玉米螟(ostrinianubilalis)具有高毒力的野生型苏云金芽胞杆菌(bacillusthuringienesis,bt)nbic-380菌株总dna为模板，pcr扩增vip3aa(genbank登录号:kt307982)全长基因约2.4kb。将vip3aa基因插入大肠杆菌(escherichiacoli)表达载体pgex-6p-1和pet-28a以及bt表达载体pbmb1a中，构建重组表达载体pgv3、pev3和pbv3。将pgv3和pev3转化大肠杆菌bl21(de3)，pbv3转化btbmb171和枯草芽胞杆菌(bacillussubtilis,bs)168菌株。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis,sds-page)分析表明，vip3aa基因在bl21(de3)、btbmb171和bs168中均有表达，蛋白质相对分子质量为88kd。纯化后的蛋白及bt中表达的蛋白对棉铃虫(helicoverpaarmigera)二龄幼虫进行了生物测定，在大肠杆菌表达的蛋白没有杀虫活性，而在芽胞杆菌中表达的蛋白有杀虫活性，半数致死浓度(mediumlethalconcentration,lc50)值分别为6.1856(btbmb171)和2.9846mg/ml(bs168)。生测结果表明，btnbic-380菌株的vip3aa基因表达的蛋白对棉龄虫具有一定杀虫活性。本研究为丰富vip的基础研究和构建高效广谱的工程菌提供基础资料。