牛胎儿成纤维细胞(befs)中过表达set和mynd结构域蛋白3基因(smyd3)对细胞增殖和诱导性多能干细胞(ipscs)诱导效率的影响

？set和mynd结构域蛋白3(setandmynddomain-containingprotein3,smyd3)是一种组蛋白h3赖氨酸残基4(lysine4,k4)三甲基化转移酶(h3k4trimethyltransferase)，其在多种癌细胞中高表达，能够促进癌细胞增殖、迁移和侵袭。为研究smyd3在牛胎儿成纤维细胞(bovineembryonicfibroblastcells,befs)中的作用，以牛(bostaurus)cdna为模板，pcr扩增牛smyd3基因cds，并将其连接到巨细胞病毒(cytomegalovirus,cmv)启动子表达载体pires2-zsgreen1上，构建高表达smyd3基因载体psmyd3-ires2-zsgreen1。表达载体转染befs后，qrt-pcr和westernblot检测其表达，噻唑蓝(3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,mtt)比色法监测其对细胞生长的影响。用鼠(musmusculus)源pou5f1转录因子(octamer-bindingtranscriptionfactor4,oct4)、性别决定基因相关转录因子2(sry(sexdeterminingregiony)-box2,sox2)、鸟类骨髓细胞瘤元癌基因同源基因(avianmyelocytomatosisviraloncogenehomolog,c-myc)和kruppel样因子4(kruppel-likefactor4,klf4)诱导高表达smyd3基因的befs，研究smyd3对befs诱导效率的影响。酶切鉴定结果表明，表达载体psmyd3-ires2-zsgreen1构建成功；qrt-pcr和westernblot结果显示，smyd3能够在befs正常表达，通过荧光筛选得到了稳定表达smyd3基因的befspsmyd3。mtt结果显示，smyd3能够促进befs的生长；转录因子诱导psmyd3细胞后，与对照组相比，细胞克隆形成率明显提高，且克隆均为oct4、nanog同源框(nanonghomeobox,nanog)和sox2染色阳性，说明smyd3能够促进诱导性多能干细胞(inducedpluripotentstemcells,ipscs)诱导效率。本研究表明smyd3对befs的生长有促进作用，并且能够提高befs向ipscs的诱导效率，为牛诱导干细胞制备及机理研究提供新的思路。