转盐生杜氏藻β-胡萝卜素羟化酶基因(chyb)烟草的获得及耐盐性鉴定

？β-胡萝卜素羟化酶(β-carotenehydroxylase,chyb)作为盐生杜氏藻(dunaliellaviridis)胡萝卜素合成代谢途径中的关键酶，催化β-胡萝卜素经两步反应合成玉米黄素。盐生杜氏藻chyb基因在植物抗逆性方面有重要研究价值。本研究利用前期克隆得到的盐生杜氏藻chyb基因(genbank登录号:jn118489)，构建了植物表达载体pcambia3301-chyb。通过根癌农杆菌(agrobacteriumtumefaciens)lba4404介导的叶盘法将其转入烟草(nicotianatabacum)，获得16株草铵膦抗性再生植株，经pcr及rt-pcr扩增分析表明，chyb基因已转入其中13株烟草植株中，并可以进行正常转录。通过测定转基因烟草的株高、叶面积、叶绿素含量、叶片相对电导率和脯氨酸含量对转基因烟草的耐盐性进行了检测，结果表明，与对照组相比，转基因烟草的株高、叶面积、叶绿素含量均极显著提高(p＜0.01)，其中转基因烟草平均株高为37.82cm，是对照组烟草平均株高的1.37倍。在100mmol/lnacl胁迫处理下，转基因烟草的成活率为84.45%，是对照组烟草的1.58倍；在200mmol/lnacl胁迫下对照组烟草萎蔫死亡，而转基因烟草仍可生长存活。经检测转基因烟草叶片的相对电导率升高但变化幅度较小，脯氨酸含量较对照组极显著增加(p＜0.01)。研究结果说明转基因烟草的耐盐性得到了提高，为进一步探讨盐生杜氏藻chyb基因在植物耐盐性方面的功能提供基础资料。