冷诱导rna结合蛋白基因(cirp)在牦牛睾丸不同发育时期的表达和定位研究

？冷诱导rna结合蛋白(cold-induciblerna-bindingprotein,cirp)是目前哺乳动物中被广泛研究的冷应激蛋白之一。本研究通过分析cirp在牦牛(bosgrunniens)睾丸不同发育阶段的表达变化，探究其在牦牛睾丸发育过程中所发挥的功能，为进一步阐明cirp在高原哺乳动物精子发生调节过程的作用机制提供相关数据。本实验采用rt-pcr法克隆牦牛cirp基因序列(kf682140)，通过实时荧光定量rt-pcr(quantitativereal-time,qrt-pcr)、westernblot及免疫组织化学链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(streptavidin-biotincomplex,sabc)技术检测1日龄、5月龄、1岁及3岁牦牛睾丸cirpmrna及蛋白的表达。rt-pcr反应扩增得到牦牛cirpmrna序列编码区长为642bp，编码213个氨基酸，编码蛋白大小约为23kd，与家牛有较高的同源性。qrt-pcr和westernblot实验结果显示，在mrna及蛋白水平cirp在各年龄牦牛睾丸中均有表达，且随着年龄的增长呈上升趋势。免疫组织化学染色结果表明，1日龄牦牛睾丸曲精小管上皮观察到较弱免疫阳性反应，阳性细胞为精原细胞；5月龄曲细精管上皮cirp表达较丰富，阳性细胞仍为精原细胞；1岁曲细精管上皮出现初级精母细胞，并与精原细胞表达阳性；3岁牦牛睾丸发育成熟，曲精小管内精原细胞和初级精母细胞的胞核强阳性表达。综上所述，牦牛睾丸中cirp表达量随年龄增长而变高，这提示cirp可能对牦牛睾丸发育及生精细胞的增殖分化具有调控和保护作用。