牦牛热休克蛋白70-12b基因(hspa12b)的克隆及其在体外受精胚胎中的表达

？为研究牦牛(bosgrunniens)热休克蛋白70-12b基因(heatshock70kdprotein-12b,hspa12b)的序列特性及其在体外受精胚胎中的表达情况，本研究根据黄牛(bostaurus)hspa12b基因序列5'端和3'端的保守序列设计特异性引物，rt-pcr扩增之后通过基因克隆得到hspa12b基因(genebank登录号:kr258751)，利用生物学信息软件对其进行生物学信息分析，并采用实时定量pcr(quantitativereal-timepcr,qrt-pcr)检测其在牦牛体外受精胚胎2-4细胞期、5-8细胞期、桑葚期、囊胚期4个不同时期胚胎中的表达水平。生物学信息分析结果显示，牦牛hspa12b基因序列具有一个长705bp的编码区，可编码234个氨基酸，其中丙氨酸(ala)含量最高(10.3%)，天冬酰胺(asn)含量最少(0.9%)；同源性和系统进化树分析显示，牦牛hspa12b基因与黄牛hspa12b的同源性最高，为99.5%，表明hspa12b在进化中具有高度保守性；编码产物无信号肽，为非跨膜蛋白，不属于分泌蛋白，整体表现为亲水性。qrt-pcr检测结果显示，hspa12b在牦牛体外受精2-4细胞期胚胎、5-8细胞期胚胎、桑椹胚和囊胚中均有表达；hspa12b在2-4细胞期胚胎中的相对表达量分别是在5-8细胞期胚胎、桑椹胚和囊胚中相对表达量的14.8148、4.2699和40.4858倍；hspa12b在2-4细胞期胚胎中的相对表达量，均与在5-8细胞期胚胎、桑椹胚和囊胚中的相对表达量差异性极显著(p＜0.01)。本研究提示，hspa12b在牦牛体外受精胚胎的发育过程中非常重要，可能起着抑制细胞凋亡，延缓细胞衰老，调控胚胎早期发育的作用。