近江牡蛎金属硫蛋白(mt)的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

？双壳贝类金属硫蛋白(metallothionein,mt)可作为指示重金属污染的生物标志物，为了进一步研究mt作为重金属污染指示分子特点及其他生物学功能，需要抗mt的特异抗体。本研究构建了双壳贝类近江牡蛎(crassostreahongkongensis)金属硫蛋白重组表达质粒pgex-4t-1/mt，将其转化到大肠杆菌(escherichiacoli)菌株m15中诱导表达，优化诱导条件后，在20℃、0.2mmol/l异丙基β-d-硫代半乳糖苷(isopropylβ-d-1-thiogalactopyranoside,iptg)诱导16h后产生大量可溶的谷胱甘肽巯基转移酶(glutathiones-transferase(gst)-taggedmt,gst-mt)融合蛋白。12%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecylsulphate-polyacrylamidegelelectrophoresis,sds-page)和westernblot分析结果表明，成功获得了重组表达蛋白gst-mt。采用谷胱甘肽琼脂糖树脂(glutathionesepharose4b)纯化该融合蛋白，于25℃凝血酶原位酶切16h获得了重组mt，其分子量为9kd。用纯化的重组mt免疫新西兰兔(oryctolaguscuniculus)，获得效价大于1∶128000的抗近江牡蛎mt的多克隆抗血清，该抗体能与近江牡蛎组织中的mt分子特异结合，实现了近江牡蛎mt的原核高效表达和多抗制备。