玉米大斑病菌钙/钙调素依赖性蛋白激酶(camk)基因家族的鉴定与表达模式分析

？钙/钙调素依赖性蛋白激酶(calcium/calmodulin-dependentproteinkinases,camks)是真核生物钙信号途径中钙调素下游的一类重要靶蛋白，能够引起众多代谢的关键酶或转录因子磷酸化，从而完成对细胞代谢活动或某些基因表达的调节。本研究利用简并引物从玉米大斑病菌(setosphaeriaturcica)中克隆到4个camks基因片段，分别命名为cak1、cak2、cak3和cak4，通过3'race和5'race得到全长cdna，cak1、cak2和cak3序列提交genbank，登录号分别为eu605885、eu605886和eu605887。cak1基因开放阅读框(openreadingframe,orf)1218bp，3'非翻译区(untranslatedregions,utr)317bp，5'utr500bp，编码405个氨基酸；cak2基因orf1194bp，3'utr400bp，5'utr563bp，编码397个氨基酸；cak3基因orf2304bp，3'utr405bp，5'utr207bp，编码767个氨基酸。生物信息学分析表明，cak1、cak2、cak3和cak4属多功能camks，均含有12个激酶保守基序；4个camks的激酶保守结构域分属不同类型，其中cak1和cak2含有典型的camk类丝/苏氨酸蛋白激酶催化结构域，cak3含有lkb1/camkk类丝/苏氨酸蛋白激酶催化结构域，而cak4含有rck1样丝/苏氨酸蛋白激酶催化结构域，并分别与真菌的camk、camkk和mapkapk有较近的亲缘关系。实时定量pcr(real-timequantitativepcr,qrt-pcr)分析表明，在诱导分生孢子萌发并形成附着胞的过程中，cak2和cak3表达较活跃，各时期表达水平均接近或高于对照，诱导6和24h时，表达显著上调(p＜0.05)；cak1和cak4则在各时期表达水平均显著低于对照(p＜0.05)。本研究获得了玉米大斑病菌中4个camks基因，并初步明确了其在病菌侵染结构发育过程中的表达模式，为深入研究该病菌ca2+途径的作用机制提供了基础资料。