猪血小板源生长因子受体α基因(pdgfrα)cdna克隆与表达分析

？血小板源生长因子受体α(platelet-derivedgrowthfactorreceptor,pdgfrα)是酪氨酸蛋白激酶受体家族成员之一，在脂代谢中具有潜在的调控作用。本实验旨在克隆猪(susscrofa)pdgfrα基因的cdna全长并分析其组织表达谱。根据genbank上已登录的人(homosapiens)、牛(bostaurus)和小鼠(musmusculus)等物种的pdgfrα基因保守序列设计引物，利用反转录pcr和race技术，克隆得到猪pdgfrα基因的cdna序列(genbank登录号:kp329568)。测序结果分析表明，猪pdgfrα基因cdna长度为6360bp，其中开放阅读框(openreadingframe,orf)为3270bp，3'非翻译区(untranslatedregions,utr)为2964bp，5'utr为126bp，共编码1089个氨基酸。该基因在基因组中大约横跨148mb，包含23个外显子和22个内含子。序列同源性分析表明，猪pdgfrα基因的核苷酸和氨基酸序列与人、牛、绵羊(ovisaries)、小鼠的相似性较高。蛋白质结构预测发现，pdgfrα蛋白具有2个跨膜螺旋，10个n-连接糖基化修饰位点，75个磷酸化修饰位点以及1个信号肽结构，且n端存在较强的疏水区域，c端则表现出较强的亲水性。实时荧光定量pcr(quantitativereal-time,qrt-pcr)分析表明，该基因在杜洛克猪的心、肝、脾、肺、肾、小肠和骨骼肌等脏器均有表达，其中在脾脏中表达量最高，肾脏、肺脏次之。该基因在不同部位骨骼肌(比目鱼肌、冈上肌、股二头肌、腰小肌、腓肠肌和眼肌)中表达分析显示，在以比目鱼肌为代表的慢肌中表达量要极显著高于在以眼肌为代表的快肌中的表达量(p＜0.01)。比较不同生长阶段pdgfrα基因的表达发现，初生阶段表达量极显著高于断奶和成年阶段(p＜0.01)。本研究获得猪pdgfrα基因cdna全长、组织表达规律以及在不同肌肉组织中的相对表达量，为进一步研究猪pdgfrα基因的功能提供了基础资料。