胸膜肺炎放线杆菌复合减毒突变株wf83δapxⅱc/apxⅰan/apxⅰac的构建

？猪传染性胸膜肺炎(porcinecontagiouspleuropneumonia,pcp)是猪(susscrofa)的一种接触性呼吸道疾病，引起该病的致病菌是胸膜肺炎放线杆菌(actinobacilluspleuropneumoniae,app)，目前该病已成为世界养猪业的五大疫病之一，造成了重大的经济损失。为了提供一种能够保护多种血清型的安全性弱毒疫苗，本研究以app血清7型菌株wf83(app-7-wf83)为基本材料，将卡那霉素抗性基因(kan)作为抗性筛选基因置换完整的溶血外毒素(actinobacilluspleuropneumoniaertx-toxin,apx)家族中的的毒素ⅱ激活基因c(apxⅱc)，同时引入app血清1型菌株(shope4074)的毒素ⅰ基因的氮端(apxⅰan)和碳端(apxⅰac)片段序列，构建重组转移载体pbslnkar，电转化将该载体导入亲本菌株app-7-wf83，获得突变株wf83δapxⅱc/apxⅰan/apxⅰac。与亲本株(app-7-wf83)相比，溶血活性检测显示，突变株wf83δapxⅱc/apxⅰan/apxⅰac无溶血性；pcr鉴定显示，wf83δapxⅱc/apxⅰan/apxⅰac缺失了377bp的apxⅱc，同时插入1188bp的apxⅰan序列和377bp的apxⅰac序列；以0.5ml的胰蛋白胨大豆肉汤(trypticasesoybroth,tsb)为空白对照，亲本株app-7-wf83组和突变株wf83δapxⅱc/apxⅰan/apxⅰac组均以1.1×109cfu/ml的量接种小鼠(musmusculus)后，亲本株组小鼠全部死亡，突变株组小鼠没有死亡情况，证实突变株的毒性显著减弱。本研究成功构建了基因缺失复合减毒株wf83δapxⅱc/apxⅰan/apxⅰac，为进一步研究基因缺失弱毒疫苗提供了基础资料。