单增李斯特氏菌lm319主要毒力基因的时序性表达研究

？单核细胞增生性李斯特氏菌(listeriamoncytogenes)是一种重要的食源性病原菌，由于其具有分布广、耐受力强、高致病力等特点而备受食品安全领域所关注。本研究通过摇瓶培养和检测菌液od600值制作了该病原菌的生长曲线；采用特异引物对单增李斯特菌lm319中27个毒力基因进行了pcr检测；采用实时荧光定量pcr技术(quantitativereal-timepcr,qrt-pcr)对其中的10个毒力基因的表达量进行了12个批次的定量检测。结果表明，lm319在培养2h内处于生长延滞期，培养2~8h为菌体的指数生长期，培养8h菌体增长量达到最高峰，8~18h为菌体生长稳定期，18h后进入衰亡期；对27个毒力基因的pcr检测结果显示，lm319中明确含有23个毒力基因；qrt-pcr定量检测结果显示，其中10个毒力基因在24h内的表达规律相似，毒力基因的表达量在菌体生长的稳定期后期(16~18h)达到高峰，此后表达量逐渐降低，但到衰亡期毒力基因的表达又呈上升趋势。同时发现，10个毒力基因的表达量差距明显且各不相同，其中细胞壁水解酶基因(invasionassociatedprotein,iap)、纤连蛋白结合蛋白基因(fibronectin-bindingprotein,fbp)、己糖磷酸盐转运蛋白基因(hexosephosphatetransporter,hpt)和srna伴侣蛋白基因(hostfactorforrnaphageqβreplicase,hfq)4个基因表达量较高，而肌动蛋白聚集蛋白基因(actinpolymerizingprotein,acta)和溶血素基因(hemolysin,hlya)两个毒力基因的表达量较低。研究表明，单增李斯特菌lm319中主要毒力基因表达量在菌体生长的稳定期后期达到高峰，到衰亡期毒力基因的表达仍然处于相对较高水平。本研究为单增李斯特菌的检测、预防提供了理论依据。