中国小麦花叶病毒(cwmv)单克隆抗体制备及其检测应用

？中国小麦花叶病是引起小麦(triticumaestivum)严重减产的中国小麦花叶病毒(chinesewheatmosaicvirus,cwmv)造成的。本研究旨在以制备的抗cwmv特异性单克隆抗体(monoclonalantibody,mab)为核心建立检测cwmv的血清学方法，为该病毒病的诊断和科学防控提供技术支撑。用cwmv提纯病毒免疫小鼠(musmusculus)，经细胞融合、培养基筛选培养、阳性细胞的检测与单克隆化后，共获得4株能分泌抗cwmv单克隆抗体的杂交瘤细胞株5h5、7c2、9a7和12e5，并注射入balb/c小鼠(musmusculus)腹腔制备单抗腹水；间接酶联免疫吸附实验(enzymelinkedimmunosorbentassay,elisa)表明，4种单抗腹水效价均达到10-7，抗体类型及亚类均为igg1、kappa链。westernblot分析表明，4株单克隆抗体均能与cwmv的外壳蛋白亚基有特异性反应。利用制备的单抗建立检测田间小麦样品中cwmv的抗原包被酶联免疫吸附实验(antigencoatingplateenzyme-linkedimmunosorbentassay,acp-elisa)和斑点酶联免疫吸附实验(dot-enzyme-linkedimmunosorbentassay,dot-elisa)，结果表明，该两种血清学方法检测感染cwmv小麦植物组织粗提液呈特异性阳性反应，而检测感染小麦黄花叶病毒(wheatyellowmosaicvirus,wymv)的小麦、感染大麦黄花叶病毒(barleyyellowmosaicvirus,baymv)的大麦(hordeumvulgare)和健康小麦均呈阴性反应，说明建立的两种方法能特异性地检测小麦植物中的cwmv。灵敏度分析表明，以5h5和12e5单抗为核心建立的acp-elisa方法检测小麦病叶的灵敏度达到1∶81920(w/v,g/ml)，而以7c2和9a7单抗为核心建立的acp-elisa方法检测小麦病叶灵敏度达到1∶40960(w/v,g/ml)倍稀释；以12e5和5h5单抗为核心建立的dot-elisa方法检测小麦病叶的灵敏度达到1∶2560倍稀释(w/v,g/ml)，而以7c2和9a7单抗为核心建立的dot-elisa方法的检测灵敏度达到1∶1280倍稀释(w/v,g/ml)。田间样品检测结果表明，建立的acp-elisa、dot-elisa方法能准确、可靠地用于小麦中cwmv病毒的检测，且进一步证明该病毒病在江苏和山东流行。cwmv单克隆抗体的制备及其血清学检测方法的建立为中国小麦cwmv的诊断、预测预报及科学防控提供了物质和技术支撑。