重组gal基因型酿酒酵母菌株的生长、发酵及遗传稳定性研究

？半乳糖激酶基因(gal1)启动子是酿酒酵母(saccharumycescerevisiae)表达外源蛋白的高效诱导性启动子，其表达效率受到gal4的调控和半乳糖的诱导，改变酵母的gal基因型有助于提高外源蛋白的表达水平，但重组gal菌株的菌株特性仍需要进一步研究以确保蛋白表达的稳定性。本研究分别对敲除了不同gal1和插入不同gal4基因拷贝数的重组gal基因型酵母进行了生长发酵性能和遗传稳定性研究。结果表明，重组菌株的gal基因型在传代过程中较为稳定，没有发生回复突变和遗传霉素(g418)和博来霉素(zeocin)抗性恢复的情况；与对照原始ms-1酵母相比，重组菌株(sg1、dg115、dpg65和gq21)的生长性能在葡萄糖培养基中的生物量略有下降。与半乳糖诱导培养基(yeastpeptonegalactose,ypg)相比，gal1基因的敲除在甘油培养基(yeastpeptonegalactoseglycerin,ypgl)中对酿酒酵母半乳糖利用的影响更为显著。其中，在ypg和ypgl培养基内，对照ms-1、sg1、dg115和dpg65利用完所有半乳糖分别需要20、20、20、26、20、44、44和68h，而gq21均无法利用半乳糖。gal基因的敲除和插入没有影响酿酒酵母的热致死温度，原始菌株和重组菌株皆为54℃。本研究将为工业利用酵母表达系统大规模、低成本生产重组蛋白提供研究基础。