一种高效的苹果茎沟病毒(asgv)taqman探针实时荧光定量(qrt-pcr)检测方法

？为建立一种检测苹果茎沟病毒(applestemgroovingvirus,asgv)的taqman探针实时荧光定量pcr(quantitativereal-timert-pcr,qrt-pcr)方法，本研究根据asgv外壳蛋白(coatprotein,cp)基因保守序列设计了特异性引物和taqman探针，以构建的asgv-cp重组质粒为阳性标准品绘制标准曲线，并对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行检验。建立的标准曲线相关系数达0.999，扩增效率为96.8%；该方法特异性好，与苹果茎痘病毒(applestempittingvirus,aspv)、苹果褪绿叶斑病毒(applechloroticleafspotvirus,aclsv)、苹果锈果类病毒(applescarskinviroid,assvd)均无交叉反应；灵敏度为10拷贝/μl，比常规rt-pcr高1000倍；批内和批间变异系数均＜1%。表明该方法具有特异性强、灵敏高和重复性好的优点，适用于实际样品中asgv的快速准确检测。