副猪嗜血杆菌wza基因缺失株的构建及生物学特性研究

？副猪嗜血杆菌(haemophilusparasuis,hps)荚膜多糖目前被认为是其主要的毒力因子之一，其wza基因在荚膜多糖的合成运输方面起重要作用。本研究通过构建puc18-lr-kan同源重组质粒和运用自然转化法，以kan抗性的tsa平板成功筛选出wza基因缺失株(zj1208-δwza)。生物学特性研究表明，zj1208-δwza缺失株和zj1208野毒株的菌落形态无明显差异，荚膜染色镜检表明在体外培养二者都能形成较薄的荚膜。在体外培养的生长速率方面，二者都在约12h时其od600达到最大值，其中zj1208-δwza缺失株od600为1.246，而zj1208野毒株为2.196，高于zj1208-δwza株0.95；二者活菌数在约8h多达到最大，zj1208野毒株活菌数对数值为9.7634，zj1208-δwza缺失株株约为9.3222，低于zj1208野毒株。菌体形态方面，在培养6h左右，zj1208-δwza缺失株菌体大多数可形成长链状或长杆状，而野毒株大多数为较松散，短小的单个菌体。与zj1208野毒株比较，zj1208-δwza株有较快的体外沉降速率，对猪肺泡巨噬细胞(porcinealveolarmacrophage,pam)的吞噬作用更加敏感，对小鼠毒力明显减弱；以上结果表明，wza基因的缺失对hpszj1208株的多项生物学特性产生了影响。本研究为进一步研究wza基因在hps荚膜形成中的作用提供基础资料。