癌胚抗原磷脂酰肌醇蛋白聚糖3单克隆抗体的制备及应用

？目的制备抗癌胚抗原磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（gpc3）单克隆抗体，并初步应用。方法利用pcr方法，将gpc3基因重组到原核表达载体pet16b中，在大肠杆菌中表达，纯化后的gpc3融合蛋白对balb/c小鼠脾内包埋免疫，取小鼠脾细胞与sp2/0细胞进行细胞融合，应用间接elisa和westernblot进行筛选及鉴定分泌特异性抗gpc3单克隆抗体的杂交瘤细胞株，间接免疫荧光检测肝癌细胞中gpc3表达。结果成功构建了gpc3原核表达载体，在大肠杆菌中的诱导表达重组gpc3蛋白。应用单克隆抗体杂交瘤技术成功制备1株稳定分泌抗gpc3单克隆抗体的杂交瘤细胞株，通过westernblot鉴定具有高度的特异性，间接免疫荧光实验显示单克隆抗体能与hepg2细胞内gpc3特异性结合。结论成功制备出特异性抗人gpc3单克隆抗体。