心肌细胞的培养鉴定及其β3-ar蛋白提取方法的比较

？目的优化培养乳鼠心肌细胞的技术，筛选出简便、准确、特异的提取心肌细胞β3-肾上腺素能受体（β3-ar）膜蛋白的方法。方法使用ⅱ型胶原酶和差速贴壁法收集心肌细胞，分别用总蛋白法、超速离心法、试剂盒法提取心肌细胞β3-ar膜蛋白；bca法进行蛋白定量；westernblot法检测蛋白样品中β3-ar和gapdh相对含量及提取蛋白的特异性。结果优化心肌细胞的培养方法可以使所得细胞产量大、浓度高，满足后续实验。试剂盒法提取蛋白的浓度（8.26±0.29）g/l＞总蛋白法提取法的（5.12±0.47）g/l＞超速离心法的（3.20±0.37）g/l，差异均有统计学意义。westernblot检测结果示，试剂盒提取法所得β3-ar膜蛋白含量（0.22±0.05）＞超速离心法（0.09±0.03）＞总蛋白提取法（0.01±0.01），差异均有统计学意义。结论优化培养心肌细胞的方法可获得高产量、高纯度的细胞。试剂盒提取法可有效提高β3-ar膜蛋白的浓度和特异性。