tudor-sn蛋白tsn结构域亚结构片段重组质粒的构建与表达

？目的：将人类tudor-sn蛋白tsn结构域基因片段的4个亚片段分别定向连入pegfp-c2载体的多克隆位点中，使它们能够分别与绿色荧光蛋白融合并在hela细胞中表达，为进一步研究tudor-sn蛋白tsn结构域不同亚区的功能奠定基础。方法：以重组质粒psg5-tudor-sn-flag为模板，pcr扩增出目的基因，将双酶切后带有粘性末端的目的片段和pegfp-c2载体连接，从而构建重组质粒pegfp-c2-tudor-sn-tsn（ⅰ~ⅳ）。将构建成功的重组质粒脂质体法转染hela细胞，并在荧光显微镜下观察融合蛋白的荧光表达情况，western印迹检测融合蛋白的表达。结果：①对重组质粒进行双酶切鉴定可见tudor-sn-tsn（ⅰ~ⅳ）的cdna片段；②脂质体转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达。③western印迹后可在相应位置检测到融合蛋白pegfp-c2-tudor-sn-tsn（ⅰ~ⅳ）。结论：①pegfp-c2-tudor-sn-tsn（ⅰ~ⅳ）重组质粒构建成功；②目的片段可与绿色荧光蛋白在hela细胞中融合表达，融合蛋白可与抗gfp抗体结合用于蛋白检测，为深入研究tudor-sn蛋白tsn结构域中不同亚结构片段的功能奠定基础。