慢病毒载体介导apelin基因转染人脐带间充质干细胞的实验研究

？【】？？目的？？构建带有荧光标记基因增强型绿色荧光蛋白（egfp）和apelin基因的重组质粒pubi-apelinflag-psv40-egfp并进行慢病毒包装，探讨其转染人脐带间充质干细胞的最佳感染复数（moi）值及目的基因表达情况。？？方法？？化学合成目的基因片段并扩增。采用in-fusion技术将酶切后的目的基因片段与线性质粒载体连接，转化入感受态dh5α细胞中后筛选阳性克隆并进行测序。重组质粒慢病毒载体转染293t细胞，包装慢病毒并测定滴度。将重组质粒慢病毒按不同moi值转染人脐带间充质干细胞，根据转染效率得到最佳moi值，并采用real-timepcr及westernblot方法检测目的基因表达情况。？结果？？通过pcr扩增获得酶切位点碱基修饰后的大小约284bp的目的基因片段，与慢病毒质粒载体连接后形成pubi-apelin-flag-psv40-egfp重组质粒，测序结果与预期完全符合，并成功包装慢病毒颗粒。最佳moi值为20，转染效率为（90.32±3.61）%。慢病毒载体能高效转染人脐带间充质干细胞且2周内持续稳定上调目的基因mrna及蛋白的表达。？？结论？？重组质粒慢病毒载体pubi-apelin-flagpsv40-egfp可有效转染人脐带间充质干细胞，并可持续高表达apelin基因