负载抗原dc与cik共培养对富集培养乳腺癌ctcs杀伤作用研究

？【】目的??观察负载抗原的树突状细胞（dc）与细胞因子诱导的杀伤细胞（cik）对富集培养乳腺癌循环肿瘤细胞（ctcs）的细胞毒作用。??方法??将有ctcs的乳腺癌患者外周血单个核细胞，磁珠分选富集表皮细胞黏附分子（epcam）+乳腺癌ctcs体外培养，并用巢式pcr、细胞免疫荧光成像（ck8/18）、细胞免疫组化（ck8/18、ck19）方法进行鉴定，分选后epcam-细胞常规诱导dc及cik；制备乳腺癌ctcs全冻融抗原（ag）冲击dc，分ag-dc-cik组、dc-cik组、dc组、cik组。台盼蓝拒染法动态监测cik细胞增殖情况，流式细胞术分析细胞免疫表型，mtt法检测对乳腺癌ctcs的杀伤活性，流式细胞术检测诱导乳腺癌ctcs的早期凋亡率，光镜及透射电镜观察细胞形态及超微结构。结果???磁珠分选富集后epcam+细胞巢式pcr可见ck19mrna条带表达，经体外培养后胞浆染ck8/18+、ck19+，ck-fitc/dapi免疫荧光染色见胞浆蓝荧光/核绿荧光的ck8/18阳性细胞。dc与cik共培养细胞增殖活性明显大于单独培养的cik（p＜0.001），dc免疫表型cd1α、cd83+cd86+、cd83+cd11c+、cd86+cd11c+及cik免疫表型cd+cd8+、cd3+cd56+的表达率ag-dc-cik组高于dc-cik组、dc组及cik组（p＜0.05）。ag-dc-cik、dc-cik、cik3组均可诱导乳腺癌ctcs凋亡，凋亡率为（56.83±3.07）％、（31.43±1.77）％、（24.70±1.51）％，两两比较差异有统计学意义，透射电镜可见诱导凋亡乳腺癌ctcs的典型微结构。??结论??磁珠分选联合细胞免疫学方法可以提高乳腺癌ctcs的检测灵敏度；经抗原冲击dc明显增加cik细胞的增殖能力和细胞毒活性,有可能作为一种临床有效的抗乳腺癌复发与转移的免疫治疗手段。