防御素5和ll37真核重组质粒构建及转染人阴道上皮细胞的研究

？目的：rt-pcr方法扩增人防御素5（hd5）及ll37cdna，构建其真核表达质粒并转染人阴道上皮原代培养细胞，观察转染后表达情况。方法：①从人阴道上皮细胞中提取总rna，经逆转录-聚合酶链反应（rt-pcr）扩增出hd5和ll37的cdna，并将其插入真核表达载体pcdna3.1（+）-egfp中，构建重组质粒pcdna3.1（+）/hd5-egfp和pcdna3.1（+）/ll37-egfp；②经k-sfm和组织块法原代培养人阴道上皮细胞并传代，将两种质粒分别或联合转染人阴道上皮细胞，转染6、12、24和48小时后，荧光显微镜检测细胞转染及elsia方法测定上清液中hd5及ll37的表达情况。结果：本研究构建了pcdna3.1(+)/hd5-egfp和pcdna3.1（+）/ll37-egfp真核表达载体，实现了hd5和ll37在阴道上皮细胞中表达，elisa方法检测细胞培养上清中有hd5和ll37蛋白分子表达，且在转染24h时表达量最高。结论：成功构建了含hd5和ll37cdna的真核表达质粒，并成功转染人阴道上皮细胞，为研究重组hd5和ll37的抗菌功能及阴道上皮细胞先天免疫机制奠定了基础。