靶向肿瘤坏死因子β小分子抑制剂的筛选及其功能鉴定

？：目的通过计算机虚拟筛选和细胞活性筛选，获得能靶向抑制肿瘤坏死因子β（tnfβ）的细胞毒活性的小分子抑制剂。方法根据tnfβ与肿瘤坏死因子ⅰ型受体（tnfr1）结合的复合晶体结构，采用计算机虚拟筛选方法初步选择对接结果较好的105个小分子化合物（c1~c105），并对其进行细胞活性筛选；mtt法检测小分子化合物抑制tnfβ对l929细胞的细胞毒性；流式细胞术测定小分子化合物对tnfβ引起的细胞凋亡的抑制作用；采用碘化丙啶（pi）单染和流式分析技术检测小分子化合物对l929细胞周期的影响；采用westernblot和双转盘激光共聚焦显微镜分析小分子化合物对tnfβ引起的下游caspase3活化的抑制作用。结果c35能有效抑制tnfβ引起的细胞毒作用，且这种抑制作用呈现剂量依赖性（半数抑制浓度=8.19μmol/l)；c35具有较低的细胞毒性，且对l929细胞周期无影响；c35能阻断tnfβ与其受体结合后引起的细胞凋亡通路，显著抑制tnfβ引起的l929细胞凋亡。结论成功筛选到一个tnfβ小分子抑制剂c35，其能阻断tnfβ引起的细胞凋亡通路，高效抑制tnfβ的细胞毒活性。