notch1(nicd)过表达真核载体构建及对大鼠bmscs增殖分化的影响

？目的构建notch1(nicd)过表达真核载体，探讨其对大鼠骨髓间充质干细胞（bonemesenehymalstemcells，bmscs）增殖分化的影响。方法以大鼠bmscs为研究对象，构建notch1(nicd)过表达真核载体，将pegfp-n1-nicd质粒转染bmscs，实验分为空白对照con组、空载体组和转染组，转染48h后观察细胞一般形态，realtimepcr和westernblotting检测nse、gfap和notch1基因和蛋白表达，流式检测转染后细胞凋亡和细胞周期情况；mtt检测增殖情况。结果经dna测序结果，重组质粒pegfp-n1-nicd编码序列与设计完全一致，转染48h后转染组和空载体组的bmscs均可表达绿色荧光。转染组notch1、gfap基因相对表达量显著高于空载体组和con组（p＜0.05），westernblotting检测结果与之类似。转染48h后，转染组活细胞比率及早期凋亡率、晚期凋亡率与con组和空载体组比较差异均具有统计学意义（p＜0.05）；空载体组与con组晚期凋亡率比较差异具有统计学意义（p＜0.05），转染组细胞处于g1/g0细胞比例显著高于con组和空载体组（p＜0.01），而处于s和g2/m期细胞比例显著低于con组和空载体组（p＜0.01），转染组增殖曲线值随时间逐渐低于con组和空载体组，到第4d时显著低于con组和空载体组（p＜0.05）。结论notch1(nicd)过表达真核载体构建成功，高表达notch1(nicd)基因可能在一定程度上诱导bmscs凋亡、抑制其增殖，且表现诱导向神经胶质样细胞分化。