施马伦贝格病毒病焦磷酸测序检测方法的建立

？拟建立施马伦贝格病毒（sbv）s基因焦磷酸测序检测方法，用于施马伦贝格病毒病的快速检测和确诊。通过对公开发表的sbvs基因序列与布尼病毒科其他11种病毒s基因进行比对，找出不同病毒变异区域集中且变异区域两侧保守的序列片段，基因合成，体外转录，作为基因扩增模板。在特异性变异序列两端的保守区域设计扩增引物，进行rt-pcr扩增。在保守区域设计双向测序引物，对rt-pcr产物进行双向焦磷酸测序。通过比对测序结果，确定是否为sbv核酸序列；优化条件，确定检测方法的敏感性、特异性和重复性，建立sbvs基因焦磷酸测序检测方法。结果：建立的施马伦贝格病毒病焦磷酸测序检测方法扩增基因片段长度为166bp；敏感性为可检测到104个拷贝；每一条测序引物可准确测出50bp左右核酸序列，双向测序可准确测出100bp左右核酸序列，具有较好特异性，完全满足施马伦贝格病毒病确诊要求；重复测序3次，均能准确测出100bp左右核酸序列。本研究建立的施马伦贝格病毒病焦磷酸测序检测方法，可用于施马伦贝格病毒病的检测和确诊，整个检测过程可在1d内完成，大大缩短了确诊时间。