牛α0干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及抗病毒活性鉴定

？克隆牛α0干扰素（boifn-α0）成熟肽基因，使其在真核细胞中表达，并研究其表达蛋白质的活性。通过pcr方法扩增得到boifn-α0成熟肽基因，然后将其连接到含分泌信号肽序列的pichiapastoris表达载体ppiczαa上，构建重组质粒ppiczαa-boifn-α0，重组质粒经pmeⅰ酶切线性化后电转化宿主菌gs115。转化子经100μg？ml-1zeocintm筛选和pcr鉴定，阳性重组菌经甲醇诱导后实现了boifn-α0在毕赤酵母系统中的分泌表达。结果表明：sds-page和westernblot结果显示表达产物相对分子质量约为18和21ku，推测表达产物发生了一定程度的糖基化。细胞病变抑制试验结果表明，重组boifn-α0具有较高的抗病毒活性，达到5.72×106u？mg-1。这些研究结果为牛ifn-α的更深层次应用奠定了基础。