牦牛乳腺上皮细胞体外培养及鉴定

？本研究旨在建立牦牛乳腺上皮细胞系，并对建立的细胞系生物学特性进行鉴定,采用组织块种植法，分离培养乳腺上皮细胞；通过胰酶消化法纯化细胞；利用免疫荧光及westernblot技术对其进行鉴定；脂质体介导法将绿色荧光蛋白基因转染进乳腺上皮细胞中，荧光显微镜下检测绿色荧光蛋白基因表达；金黄色葡萄球菌侵染牦牛乳腺上皮细胞，流式细胞仪（annexinv/pi双染法）检测乳腺上皮细胞的凋亡，rt-pcr检测感染细胞中抗菌肽以及凋亡因子表达。结果表明，分离纯化获得牦牛乳腺上皮细胞，细胞角蛋白18表达呈阳性，波形蛋白表达呈阴性，证明培养的细胞是上皮细胞并且没有成纤维细胞污染；β-酪蛋白表达呈阳性，说明建立的乳腺上皮细胞具有一定的泌乳功能；荧光显微镜能够检测到绿色荧光蛋白表达，表明egfp基因成功导入了乳腺上皮细胞；金黄色葡萄球菌感染牦牛乳腺上皮细胞3h后，annexinv/pi双染法检测发现感染组细胞凋亡率明显升高，差异显著（p<0.05）；感染细胞中tap（p<0.01）、bnbd5（p<0.01）及bax（p<0.01）表达量明显增高，bcl-2（p<0.05）表达量降低。综上表明，本研究成功建立了一株稳定的牦牛乳腺上皮细胞系，该细胞系能够作为研究牦牛乳腺发育及分化的体外研究模型。