牛白血病病毒env（gp51）基因的克隆和原核表达及间接elisa抗体检测方法的建立

？从持续感染牛白血病病毒（blv）的羊胎肾细胞（flk-blv）中提取前病毒dna，用pcr方法扩增编码牛白血病病毒gp51蛋白的env（gp51）基因，序列测定结果表明扩增片段全长828bp。将扩增基因插入原核表达载体pet-32a构建pet-32a-gp51重组质粒，转化bl21（de3）进行诱导表达，sdspage电泳结果表明重组融合蛋白大小约为43000，western-blot结果表明重组表达蛋白具有免疫反应性。以纯化的重组蛋白gp51作为抗原，建立检测blv抗体的间接elisa诊断方法。结果表明，抗原gp51的最佳包被浓度为2.19μg·ml-1，血清的最佳稀释倍数为1∶80，阳性判定标准确定为样品od450nm大于0.451。用该方法对12份参考血清进行检测，准确率为91.67%。