猪圆环病毒2型-伪狂犬重组病毒活疫苗sa215(c)株的构建

？根据genbank发表的猪圆环病毒2型（pcv2）序列设计一对特异性引物，采用pcr方法，扩增pcv2orf2基因，将orf2基因插入到含有egfp报告基因的转移载体质粒ppi-2.egfp，获得重组中间转移质粒ppi-2.egfp-orf2。采用脂质体介导法，将重组中间转移载体ppi-2.egfp-orf2与伪狂犬病毒sa215株基因组共转染真核st细胞，通过空斑纯化得到表达pcv2orf2基因和绿色荧光蛋白基因的重组伪狂犬病毒sa215(c)。经检测，重组病毒能表达具有生物活性的orf2基因蛋白和绿色荧光蛋白。并且重组病毒及亲本株在同一细胞上的增殖滴度基本相同，表明egfp和pcv2orf2基因的插入不影响prvsa215的增殖。该重组病毒可作为猪圆环病毒2型和伪狂犬病毒的候选疫苗毒株。