超低温冷冻过程引起猪精子产生“似凋亡”变化

？？测定超低温冷冻保存过程能否诱导猪冻融精子产生“似凋亡”变化，探讨猪冻融精子活力降低的分子机理。利用annexin-v/pi及jc-1荧光抗体试剂盒与流式细胞术相结合的方法，检测猪精子冷冻前后及不同培养时间冻融精子质膜中磷脂酰丝氨酸（ps）位置及线粒体膜电位（δψm）变化；蛋白免疫印迹分析方法测定猪精子bcl-2、caspase-9及caspase-3等“凋亡”因子含量变化。猪精子超低温冷冻保存后活性精子的比例（54.4%）显著低于鲜精组（87.9%）（p<0.05），其中ps移位的精子“似凋亡”比例约为26.8%，同鲜精组（5.6%）相比增加21.2个百分点（p<0.05）；降温平衡及冷冻复苏后猪精子线粒体膜电位变化显著，其中低δψm精子比例显著增加（p<0.05）；同新鲜精子（19.6%）相比，冷冻复苏后（79.4%）低δψm精子比例提高59.8个百分点（p<0.05）；冻融精子中bcl-2、caspase-9及caspase-3等凋亡因子活性显著高于鲜精子及降温平衡后的精子(p<0.05)，由此证明冻融过程能诱导猪精子进入凋亡状态。超低温冷冻保存能导致猪冻融精子质膜磷脂酰丝氨酸（ps）移位及线粒体膜电位降低，同时激发精子bcl-2、caspase-9及caspase-3等凋亡因子活性，诱导成活冻融精子提前进入“似凋亡”状态，明显缩短冻融精子存活时间，这可能是猪冻精繁殖力降低的又一诱因。