1种高效纳米抗体生产方法的建立

？？为实现纳米抗体的简单、高效、低成本表达，在已有的商品化原核表达载体的基础上，对其进行改造，在靶蛋白n端分别融合3种不同串联融合标签his-intein、his-sumo-intein和his-trx-intein，以本实验室筛选的抗猪圆环病毒2（pcv2）cap蛋白的纳米抗体基因为靶蛋白，构建了phsie-nb（his-sumo-intein）、phsie-intein-nb（his-intein）和pet32a-intein-nb（his-trx-intein）3种表达载体。分别转化大肠杆菌bl21(de3)，用iptg诱导融合蛋白表达，在不同表达条件下比较，选取可溶性表达最好的载体大量表达，用ni-nta金属螯合层析柱进行纯化，并利用intein自剪切去除标签，纯化纳米抗体。且用制备的纳米抗体作为包被抗体，做双抗体夹心elisa检测其反应原性。结果显示3种不同融合标签的纳米抗体都可成功表达，而融合his-trx-intein标签的载体可溶性表达量最高。融合蛋白经ph7、25℃剪切24h后可以得到不含融合标签的纳米抗体。双抗体夹心elisa检测，统计学分析，制备的抗pcv2cap纳米抗体蛋白包被的样品组与阳性对照组差异不显著(p＞0.05)，因此制备的纳米抗体是有活性的。本研究成功建立一种高效表达、纯化纳米抗体的方法，可以增加蛋白表达量、可溶性和简化蛋白纯化过程，获得具有活性的无标签的纳米抗体。为其进一步的纳米抗体理论研究和生产应用提供技术支持。