μ-calpain激活因子uk114的克隆与序列分析

？构建了山羊肝脏cdna文库，采用平板裂解法提取噬菌体dna，以此为模板用所设计的引物以pcr法扩增出μcalpain激活蛋白uk114基因，并克隆到pgem-teasy载体。序列分析表明，uk114cdna包括起始密码子和终止密码子在内全长共计1017bp,5′非编码区长为39bp，3′非编码区长为567bp，编码区长411bp，编码137个氨基酸序列。与genbank中colombo等所得uk114基因比较表明：在5′非编码区，uk114为102bp，克隆的uk114为39bp，且二者仅有9个核苷酸序列是相同的；紧接着是起始密码子atg，然后是一个411bp的阅读框（40nt~450nt），编码137个氨基酸，理论分子量约为15ku，二者在编码区仅有1个bp不同，为无义突变；在3′非编码区为552bp，所克隆的uk114为567bp，二者在此区域有57个核苷酸序列是不同的：uk114为polya，所克隆的是不同的核苷酸。二者的同源性为91%，突变的86个核苷酸中都为无义突变，开放阅读框中仅有一个核苷酸突变。