重叠延伸pcr法体外重建鸡主要组织相容性复合体ⅰ

？本研究旨在体外重建鸡主要组织相容性复合体ⅰ类分子（mhcⅰ）重链(α链)胞外区与轻链(β2m)成熟肽的重组嵌合分子。采用rt-pcr法分别扩增鸡mhcⅰ的重链胞外区和轻链的成熟肽序列；采用重叠延伸pcr(splicingoverlapextensionpcrmethod，soe-pcr)把通过45个碱基的链连接的鸡mhcⅰ重链胞外区基因和轻链成熟肽基因重组到可溶性表达质粒pmal-p2x进行可溶性表达。经琼脂糖凝胶电泳证明rt-pcr可分别扩增出鸡mhcⅰα链胞外区基因和β2m成熟肽基因，大小符合预期。采用mhcⅰα链胞外区序列的反义引物与β2m成熟肽基因正义引物有15个碱基重叠的两对引物，以mhcⅰα链胞外区序列与β2m成熟肽序列pcr产物的混合物作为模板，进行重叠延伸获得了预期大小的连接片段；测序显示重组质粒上mhcⅰα链胞外区序列与轻链β2m成熟肽基因的靶序列由一柔性的linker相连，阅读框正确且无移码。本研究表明soe-pcr是体外重构鸡mhcⅰ的一种简捷可行方法。