口蹄疫病毒非结构蛋白2c基因在昆虫细胞中的表达及应用

？研究口蹄疫病毒(fmdv)非结构蛋白（nsp）2c在区分灭活疫苗免疫动物与自然感染动物方面的意义。本研究将fmdvnsp2c基因，克隆到穿梭载体pfastbachtb，将其转入含骨架载体bacmid的dh10bac，经蓝白斑筛选得到重组骨架质粒bacmid2c。将bacmid2c转染昆虫细胞sf9，鉴定正确后，经3次增殖获得高滴度的p3代病毒后，在highfive细胞中进行目的蛋白的表达。sdspage结果显示在highfive细胞中得到了相对分子质量约为38.93ku的目的蛋白2c，westernblotting及dotelisa结果显示，该表达产物对fmdv感染动物阳性血清有良好的反应性。以电泳纯化的2c蛋白为抗原建立间接elisa，检测健康非免疫动物、免疫动物及fmdv试验感染动物血清，结果表明2celisa不但能区分免疫动物和感染动物的血清，而且还能检测fmdv感染早期动物血清中的2c抗体。说明昆虫细胞表达的2c蛋白可作为fmdv疫苗免疫动物与自然感染动物鉴别诊断的良好抗原。2c基因在bactobac系统中的成功表达为建立通过检测几种nsp抗体，筛查感染及隐性带毒动物，净化畜群的方法奠定了基础。