鸭肥胖基因的分子克隆、序列分析及原核表达

？根据人、小鼠、猪等动物的肥胖基因编码区序列的保守性设计1对引物，利用rt-pcr技术扩增出鸭肥胖基因的cdna编码序列，将pcr产物插入pgem-t载体，经pcr和双酶切鉴定正确后进行序列测定，分析表明该cdna序列由438个核苷酸组成，编码146个氨基酸组成的多肽，鸭与人、猪、小鼠、大鼠的核苷酸相似性分别为83%、84%、98%、94%；氨基酸的相似性分别为86%、83%、99%、96%。为了研究鸭肥胖基因体外表达的特点，构建了原核表达载体pet-28a-ya,在大肠杆菌中进行了诱导表达。结果表明，鸭肥胖基因在大肠杆菌中进行了高效特异性融合表达，融合蛋白分子量约为20ku，其中16ku为鸭肥胖基因表达的蛋白质，经薄层扫描分析，目的蛋白约占菌体总蛋白的30％。鸭肥胖基因的克隆和表达研究，为进一步研究鸭leptin的功能与应用奠定了基础。