多重pcr方法快速检测猪的5种呼吸道病原菌

？猪胸膜肺炎放线杆菌(app)、副猪嗜血杆菌(hps)、支气管败血波氏杆菌(bb)、产毒性多杀巴氏杆菌(t+pm)和猪肺炎支原体(mhp)是最常见的几种猪呼吸道病原菌。笔者参照文献报道的基因序列设计针对app、hps、bb、t+pm和mhp的特异性引物，对单一pcr条件进行系统优化后建立5重pcr方法。该多重pcr方法能对同一样品中5种病原菌的dna模板进行扩增，且在5种病原菌之间没有交叉反应；对大肠杆菌等其它6种常见猪细菌性病原的检测结果均为阴性；对5种病原菌dna模板检出的最小量均低于160pg，且能从攻毒小鼠（app、hps、bb和t+pm）肺脏组织8h增菌的培养物中快速检测出相应的病原菌。对中国华中地区269份临床样本的检测结果表明，5种呼吸道病原菌在华中地区猪群中普遍存在，且混合感染情况十分严重。这些试验结果表明该多重pcr方法可用于猪呼吸道病原菌app、hps、bb、t+pm和mhp的单一或混合感染的鉴别诊断及病原流行病学调查。