含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒的构建

？将扩增得到的ppvsc-1株vp2基因产物插入转移载体质粒ppi-2.egfp中，构建了含ppvvp2基因及其egfp报告基因的prv基因缺失表达载体质粒ppi-2.egfp.vp2。采用磷酸钙转染系统，将ppi-2.egfp.vp2dna和prvdna共转染vero细胞后通过直接荧光观察、dot-blot核酸杂交筛选得到几株重组病毒,将其中一株（命名为sa215-b）dna用bamhⅰ酶切和southern转印杂交进一步验证重组病毒构建成功，并通过sds-page电泳和western免疫印迹检测表明ppvvp2基因在重组病毒内获得表达，产生大小约93ku的融合蛋白，同时融合蛋白中的ppvvp2结构蛋白仍然保持了原有的反应原性,表明成功构建了含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒。