溆浦鹅卵泡抑制素α亚基编码区cdna克隆及其原核表达

？根据genbank中鸡卵泡抑制素α亚基序列设计引物，对该序列按大肠杆菌嗜好密码子进行优化，在设计的引物两端分别加上限制性内切酶sacⅰ和xhoⅱ的识别位点序列。利用rt-pcr技术从溆浦鹅卵泡的颗粒细胞总rna中扩增出抑制素α亚基成熟区序列，经pcr扩增出354bp片段，该片段与pmd18-t载体连接，转化jm109感受态细胞，所得阳性克隆进行双酶切鉴定和pcr鉴定，并进行了测序分析，得到的克隆序列与设计的序列基本一致。表明成功地获得了抑制素α亚基编码序列的克隆载体。从阳性细菌中提取质粒，经sacⅰ和xhoⅰ酶切，回收354bp目的片段，定向克隆到pet28a中，转化dh5α受体菌，提取质粒，再转化到bl21（de3）中，成功筛选出阳性克隆。阳性菌经iptg诱导，通过sds-page，检测出溆浦鹅卵泡抑制素α亚基编码区的表达。