猪圆环病毒2型原位杂交检测技术的建立与应用

？参照genbank发表的猪圆环病毒2型（pcv2）orf2基因序列设计引物，利用pcr扩增得到pcv2bf株341bp的核酸片段，用随机引物法制备出地高辛标记的核酸探针。制备的探针与pcv1、prrsv、ppv、prv等不发生反应，可检测的最低pcv2dna含量为1.78pg。对30份临床组织样本进行了检测，并与pcr比较，结果表明，阴性符合率为100%，阳性符合率为88.9%。应用原位杂交技术分析了pcv2在人工感染仔猪主要组织中的分布，结果表明，感染后3d，从仔猪的淋巴结、胸腺、肺脏、脾脏、鼻黏膜可检测到阳性信号，感染后21d，肝脏、肾脏、胰腺和回肠可检出阳性信号，至感染后42d，可从心脏、胃、脑检出阳性信号。在整个实验过程中会厌软骨、膀胱、皮肤、肌肉等组织均为阴性。本研究结果表明，建立的pcv2原位杂交技术具有良好的敏感性和特异性，可用于pcv2的实验室诊断和感染靶细胞的定位分析。