表达猪流感病毒血凝素基因的重组腺病毒的构建及免疫原性分析

？通过细菌内同源重组的方法成功构建了表达h3n2亚型猪流感病毒血凝素的重组腺病毒。首先将血凝素基因亚克隆到穿梭载体质粒padenovator-cmv5-ires-gfp上，与腺病毒基因组质粒padenovatorδe1/e3共转化大肠杆菌bj5183菌株，经细菌内同源重组产生重组腺病毒质粒pad-ha-gfp。将该重组质粒转染293细胞以包装重组腺病毒。根据报告基因gfp的表达及westernblot分析，证明获得了可正确表达猪流感病毒血凝素的重组腺病毒rad-ha-gfp。重组腺病毒经一次性腹腔注射接种昆明鼠，2周后可检测到血凝抑制抗体，并且抗体至少可以持续12周，证实重组腺病毒介导表达的血凝素蛋白具有良好的免疫原性，可诱导小鼠产生高滴度的特异性抗体。