山羊sox2基因克隆、原核表达和gst融合蛋白纯化

？本研究旨在克隆山羊sox2基因，构建pgexsox2原核表达重组质粒，从大肠杆菌中获得纯化的gstsox2融合蛋白。应用rtpcr方法从6周龄胎山羊生殖嵴扩增sox2基因编码全序列，将其克隆到pmd18t载体，然后再亚克隆到pgexkg表达载体。重组质粒pgexsox2转化大肠杆菌bl21(de3),经iptg诱导，用sdspage电泳及westernblotting检测gstsox2融合蛋白表达，用谷胱甘肽sepharose4b介质分离纯化该融合蛋白。结果表明,山羊sox2基因编码序列全长为960bp；在优化的表达条件（1mmol·l1iptg，22℃诱导16h）下，重组质粒（pgexsox2）在大肠杆菌得到了高效表达；谷胱甘肽sepharose4b颗粒纯化蛋白得到预期大小的融合蛋白(约60ku)。结论，本研究克隆了山羊sox2基因，获得了纯化的gstsox2融合蛋白，为制备其多克隆抗体奠定了基础，为进一步研究山羊ips细胞（inducedpluripotentstemcells）创造了条件。