牛偏爱密码子优化后的beta蛋白多克隆抗体制备

？本研究旨在优化λ噬菌体bet基因，使其能够在牛细胞中高效表达，通过密码子优化及全基因合成方法制备牛bet基因，并进行原核表达和多克隆抗体制备及抗体效价评估。从genbank中获得λ噬菌体bet基因的序列，登录号为ap005153，用牛偏爱密码子对其进行优化并将其合成。根据优化后的基因序列设计引物，用pcr扩增优化后的bet基因，随后将其克隆到pet28原核表达载体，并转化入大肠杆菌bl21中进行诱导表达。表达的蛋白产物利用亲和层析的方法进行纯化，用histag的抗体进行westernblot鉴定。用纯化后的蛋白免疫cd1小鼠，得到抗beta蛋白的血清，通过elisa测定该多克隆抗体的滴度。结果表明：通过双酶切和测序，成功挑选出正确的原核表达质粒pet-bet；sds-page，电泳结果显示融合蛋白表达成功；用纯化后的蛋白免疫试验鼠后得到多克隆抗体，经westernblot检测，该多克隆抗体能与his-beta融合蛋白特异性结合；经elisa方法检测该多克隆抗体的滴度为1∶41700。成功地制备了beta蛋白的多克隆抗体，为深入探索bet基因的生物学功能和在牛及大型哺乳动物中的应用奠定了基础。