ibdv感染鸡后外周血淋巴细胞pd-1及其配体pd-l1/pd-l2转录变化的初步分析

？建立鸡pd-1及配体pd-l1/pd-l2sybrgreenⅰ实时荧光定量rt-pcr检测方法，并用所建立的方法研究和分析雏鸡感染ibdv的不同阶段体内pd-1及配体pd-l1/pd-l2的转录变化。根据genbank中pd-1、pd-l1和pd-l2的基因序列，分别设计特异引物扩增目的基因，得到各自阳性克隆质粒，以阳性质粒作为标准品建立标准曲线，并进行敏感性、特异性和重复性试验。应用所建立的实时荧光定量rt-pcr方法对4周龄健康雏鸡人工感染ibdv后第3、5、7、10天pbmc中pd-1及配体pd-l1/pd-l2的转录变化进行检测，同时用半定量rt-pcr方法以及ibdv快速检测试纸条对病毒感染后各时间点法氏囊组织中ibdv的载量进行检测。结果表明，建立的方法在1×101～1×109copies·μl－1模板范围内具有良好的线性关系（r2>0.99），可检测至少101copies·μl－1的阳性标准样品，且具有较好的特异性和重复性。ibdv感染后，病毒在雏鸡体内复制逐渐增加，至第5天病毒载量达到最高。实时荧光定量rt-pcr检测结果表明，pd-1及配体pd-l1/pd-l2在病毒感染后不同阶段转录量均有所升高，其中pd-1在病毒感染后第7天显著（p<0.05）升高，在病毒感染后第3天pd-l1极显著（p<0.01）升高，pd-l2显著（p<0.05）升高。本研究成功建立了pd-1及配体pd-l1/pd-l2实时荧光定量rt-pcr检测方法；并应用该方法初步分析了pd-1及配体pd-l1/pd-l2在ibdv感染不同阶段的转录变化，发现ibdv感染后不同阶段pd-1及配体pd-l1/pd-l2的转录均升高，且pd-l1、pd-l2的转录先于pd-1升高，并与病毒载量呈正相关。