a型鸭肝炎病毒微基因组的构建

？为研究a型鸭肝炎病毒（dhav)非编码区的结构和功能，笔者拟构建该病毒的微基因组并对其进行初步鉴定。采用酶切的方法将萤火虫荧光素酶报告基因（fluc）与a型鸭肝炎病毒的orf进行替换；并在5′utr上游插入海肾荧光素酶报告基因rluc作为内参基因；同时还在rluc上游引入锤头状核酶，3′utr下游引入丁型肝炎核酶，至此得到了含有双报告基因的a型鸭肝炎病毒微基因组（prluc-fluc）。将prluc-fluc转染df-1细胞，8h便可以检测到报告基因的表达，24h表达量达到峰值。上述结果表明，已经成功构建了a型鸭肝炎病毒微基因组，这为进一步研究病毒非编码区的结构和功能以及病毒的翻译或复制的调控机理提供了良好的技术平台。