徐淮山羊c-myc基因启动子的克隆及其功能的初步分析

？本研究旨在确定徐淮山羊c-myc基因启动子区域，找出该基因启动子的核心调控区，初步探讨c-myc基因的表达调控机制。根据ucsc基因组数据库已公布的绵羊c-myc基因的启动子序列，设计特异性pcr引物扩增c-myc基因的一系列启动子缺失片段，定向克隆至pegfp-n1和pgl3-c-myc，分别转染gff、cos7及p19细胞，并进行tsa和nfat1诱导，同时对-402～-249bp区域的转录因子sp1结合位点进行定点突变，最后进行双荧光报告基因活性检测。结果表明，徐淮山羊c-myc基因5′侧翼区-1334～+1bp区域的启动子活性最强，-402～+1bp区域为c-myc基因启动子基本活性区域。进一步研究发现，-1334~-971bp、-587～-147bp区域存在正调控元件，-1976～-1334bp、-971～-587bp区域存在负调控元件。tsa和nfat1均能增强c-myc启动子的活性，sp1结合位点定点突变后，启动子活性降低。本试验通过构建包含c-myc基因启动子不同片段的重组报告基因载体并比较其转录活性，确定了c-myc基因启动子的核心区域，发现转录因子sp1是c-myc基因启动子核心区域的调控元件，为进一步研究c-myc基因的表达调控机制奠定了基础。