鸡源bursin-scfv噬菌体展示文库的构建及初步筛选

？本研究利用抗三肽囊素(bursin)单克隆抗体免疫spf来航鸡，获得产生抗独特型抗体的脾细胞，从中提取总rna，经反转录合成cdna第一链。以cdna第一链为模板，根据来航鸡igg抗体重链（vh）、轻链（vl）可变区基因fr设计引物，进行pcr扩增。在体外扩增出该抗体的可变区vh和vl基因（大小分别约为370和320bp）。通过重叠延伸反应(soe)，以（gly4ser）3为连接肽，将vh和vl基因连接成为vh-linker-vlscfv，将scfvdna与噬菌粒载体phen1的连接产物转化于大肠杆菌tg1，经辅助噬菌体m13k07感染后，获得重组的鸡源抗三肽囊素独特型抗体全套单链噬菌体抗体库。并测得该库容量约为5×105，噬菌体中scfv基因的插入率为80%，用辅助噬菌体援救后，得到滴度为1011pfu/ml的初级噬菌体抗体库。用抗bursin单克隆抗体（2f9-4/hu2）进行4轮“吸附洗脱扩增”的淘筛，出现特异性富集。经elisa、动物试验表明所筛选的5个阳性克隆可与抗bursin单克隆抗体（2f9-4/hu2）特异性结合，并能促进抗体的生产。